LyoDt® Real-Time PCR Detektionsreagenz für Cronobacter Gefriergetrocknetes Pulver

LyoDt® Echtzeit-PCR-Detektionsreagenz für Cronobacter Gefriertrocknetes Pulver

1.Einleitung

Kronobacterist eine neu definierte Bakteriengattung, deren VorgängerEnterobacter sakazakii. Das ist eine Entzündung. Kronobacterist ein schwerwiegender durch Lebensmittel übertragener Krankheitserreger, der hauptsächlich durch kontaminierte Säuglingsnahrung übertragen wird und Neugeborenenmeningitis, Sepsis und nekrotisierende Enterokolitis verursacht.

Dieses Produkt ist ein gefriergetrocknetes Echtzeit-PCR-Reagenz zur Detektion vonKronobacterEs verwendet das stark konservierte ompA-Gen vonKronobacterEs handelt sich um eine Mastermix, die alle notwendigen Inhaltsstoffe enthält, mit Ausnahme der Muster-DNA, und wird als Einzeltest in PCR-Röhren zur einfachen Verwendung vorgegeben.Dieses Produkt benötigt keine Kaltkette für Transport und Lagerung, wodurch die Versandkosten erheblich gesenkt und mögliche Verluste durch Reagenzverschwendung und Aerosoleinschmutzung beseitigt werden.

2. Spezifikationen und Zusammensetzung

3. Lagerung und Haltbarkeit

Aufbewahren bei Raumtemperatur (5-30°C). Es ist bis zu 12 Monate stabil. Nach dem Öffnen der Vakuumverpackung müssen die nicht verwendeten Produkte in den mitgelieferten wiederverschließbaren Plastikbeuteln mit den Trocknungsmitteln aufbewahrt werden.und in der Aluminiumfolie.

HINWEIS:

Die Verkleinerung des Reagenzpellets ist ein Hinweis darauf, dass Feuchtigkeit in das Rohr eindringt und das Reagenz dampft.Alle Reagenzien mit deutlich kleineren Pelletgrößen als üblich sollten vor der Verwendung entsorgt oder mit Positivkontrolle getestet werden.zur Probenprüfung.

4Zusätzliche Ausrüstung und Reagenzien erforderlich

1) Echtzeit-PCR-Instrument

2) Pipetten und Spitzen

3) Nucleasefreies Wasser

4) Nukleinsäure-Extraktions-Kit

5. Kompatible Echtzeit-PCR-Systeme

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. akzeptable Exemplare

Nahrungsmittelanreicherungsbrühe, Erbrechen, Durchfallproben usw.

7. OPERATIONSVORSCHLUSS

1) Extraktion von Nukleinsäuren

Extrahieren Sie DNA aus Proben mit einem richtigen Extraktions-Kit.Es wird empfohlen, dieDNAwird mit etwa 100 μl Elutionspuffer elutiert(TEodernukleasefreies H₂O) im letzten Schritt derAbbau.Die gereinigte Nukleinsäure sollte sofort verwendet oder bei -20°C aufbewahrt werden.

2) Vorbereitung der Positivkontrolle

Die positive Kontrolle kann vor der Rehydratation bis zu 12 Monate bei Raumtemperatur gelagert werden.₂O, bei niedriger Drehzahl 15-20 Sekunden lang vorgetrieben und bei niedriger Drehzahl 15-20 Sekunden lang zentrifugiert.

3) Echtzeit-PCR-Mischvorbereitung

A) Öffnen Sie die Vakuumverpackung und nehmen Sie die 8-Rohrstreifen mit dem Reagenzmittel heraus.Wenn die mitgelieferten Schläuche nicht mit Ihrem Instrument kompatibel sind, übertragen Sie die Reagenzpellets in ein mit Ihrem Gerät kompatibles optisches Rohr.

B) Öffnen Sie die Röhren und entsorgen Sie die Kappen (nicht geeignet für Echtzeit-PCR-Maschinen) und bereiten Sie die Reaktionsmischung wie folgt auf Eis vor.

Schritt derAbbau.Die gereinigte Nukleinsäure sollte sofort verwendet oder bei -20°C aufbewahrt werden.

2) Vorbereitung der Positivkontrolle

Die positive Kontrolle kann vor der Rehydratation bis zu 12 Monate bei Raumtemperatur gelagert werden.₂O, bei niedriger Drehzahl 15-20 Sekunden lang vorgetrieben und bei niedriger Drehzahl 15-20 Sekunden lang zentrifugiert.

3) Echtzeit-PCR-Mischvorbereitung

A) Öffnen Sie die Vakuumverpackung und nehmen Sie die 8-Rohrstreifen mit dem Reagenzmittel heraus.Wenn die mitgelieferten Schläuche nicht mit Ihrem Instrument kompatibel sind, übertragen Sie die Reagenzpellets in ein mit Ihrem Gerät kompatibles optisches Rohr.

B) Öffnen Sie die Röhren und entsorgen Sie die Kappen (nicht geeignet für Echtzeit-PCR-Maschinen) und bereiten Sie die Reaktionsmischung wie folgt auf Eis vor.

* Nucleasefreies Wasser kann als negative Kontrolle verwendet werden.

• Die PCR wird mit Kappen (Streifen), die für die Echtzeit-PCR geeignet sind, abgedeckt (nicht bereitgestellt).

D) Wirbeln Sie die Röhren mit geringer Geschwindigkeit für 10 bis 15 Sekunden und zentriformieren Sie sie bei 3000 Rpm für 20 Sekunden und legen Sie sie in ein Echtzeit-PCR-Instrument.

2) RT-PCR-Einrichtung

Das Reaktionsvolumen auf 25 μl und das PCR-Verstärkungsverfahren wie unten festgelegt.

3) Analyse und Interpretation der Ergebnisse