Gefriergetrocknetes Echtzeit-PCR-Detektionsreagenz zur hochsensitiven Detektion von Listeria monocytogenes ohne Kühlkettenanforderung

LyoDt^®Gefriertrocknete PCR in Echtzeit Detektionsreagenzium für Listeria monocytogenes

Verwendung- Ich weiß.s Handbuch

1.Beschreibung

Listeria monocytogenes,ein Gram-positiver kleiner Bakillus, ist ein zoonotischer Erreger, der hauptsächlich durch den Stuhl-Mundweg übertragen wird.Die Infektion zeigt sich typischerweise als Sepsis., Meningitis und Monozytose.

Dieses Produkt ist ein gefriergetrocknetes Echtzeit-PCR-Reagenzfür die Ermittlung vonListeria monocytogenes. Es verwendet die hochkonservierten HlyA Gen vonListeria monocytogenes als Detektionsziel. Es handelt sich um einen Mastermix, der alle notwendigen Inhaltsstoffe enthält, mit Ausnahme der Muster-DNA, und er wird als Einzeltest in PCR-Röhren zur einfachen Verwendung vorbereitet.Dieses Produkt benötigt keine Kaltkette für Transport und Lagerung, wodurch die Versandkosten erheblich gesenkt und mögliche Verluste durch Reagenzverschwendung und Aerosoleinschmutzung beseitigt werden.

2. Spezifikationen und Zusammensetzung

3. Lagerung und Haltbarkeit

Aufbewahrenbei Umgebungstemperatur (5 bis 30)°C). Es ist bis zu 12 Monate stabil.. Nach dem Öffnen der Vakuumverpackung lagern Sie die nicht verwendeten Produkte in den mitgelieferten wiederverschließbaren Plastikbeuteln mit den Trocknungsmitteln.undin der Aluminiumfolie-Tasche. 

HINWEIS: 

Die Verkleinerung des Reagenzpellets ist ein Hinweis darauf, dass Feuchtigkeit in das Rohr eindringt und das Reagenz dampft.Alle Reagenzien mit einer deutlich kleineren Pelletgröße als üblich sollten vor der Verwendung entsorgt oder mit einer Positivkontrolle getestet werden. zur Probenprüfung.

4Zusätzliche Ausrüstung und Reagenzien erforderlich

1)Echtzeit-PCR-Instrument

2)- Das ist Pip.Ätzenund Trinkgeld

3)Neutralen-freies Wasser

4)Kits zur Extraktion von Nukleinsäure

5. Kompatible Echtzeit-PCR-Systeme

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. akzeptable Exemplare

Nahrungsmittelanreicherungsbrühe, Erbrechen, Durchfallproben usw.

7. OPERATIONSVORSCHLUSS

1)KernenergieEineCIDEAbzug

AuszugDNAvon Proben mit einem geeigneten Extraktions-Kit.Es wird empfohlen, dieDNAwird mit etwa 100 μl Elutionspuffer elutiert(TE odernukleasefreies H₂O)in der letzten Stufe derAbbau.Die gereinigte Nukleinsäure sollte sofort verwendet oder bei -20°C aufbewahrt werden.

2)Vorbereitung der Positivkontrolle

Die positive Kontrolle kann vor der Rehydrierung bei Umgebungstemperatur gelagert werden für bis zu 12 Monate.Das ist es.vor der Anwendung rehydriert werdendurch Hinzufügen250μlvon TE-Puffer oder nucleasefreiH₂Oh, das ist...Wird mit geringer Geschwindigkeit für 15-20 Sekunden gedreht und mit geringer Geschwindigkeit für 15-20 Sekunden zentrifugiert.bei -20°C.

3)PCR in EchtzeitMIXPWiedergutmachung

A) Öffnen Sie die Vakuumverpackung und nehmen Sie den 8-Rohrstreifen heraus.sÜberprüfen Sie, ob die Pellets am unteren Ende des Schlauchs liegen. (Verringern Sie die Anzahl der Schläuche nach Bedarf wennnotwendig)Wenn die mitgelieferten Röhren nicht mit Ihrem Gerät kompatibel sind, übertragen Sie das Reagenzpellett auf ein mit Ihrem Gerät kompatibles optisches Rohr.

B) Öffnen Sie die Röhren und entsorgen Sie die Kappen (nicht geeignet für Echtzeit-PCR-Maschinen) und bereiten Sie die Reaktionsmischung wie folgt auf Eis vor.

* Nucleasefreies Wasser kann als negative Kontrolle verwendet werden.

C)Die PCR wird mit für die Echtzeit-PCR geeigneten Kappen (Streifen) abgedeckt.(nicht angegeben).

D) Wirbeln Sie die Röhren mit geringer Geschwindigkeit für 10 bis 15 Sekunden und zentriformieren Sie sie bei 3000 Rpm für 20 Sekunden und legen Sie sie in ein Echtzeit-PCR-Instrument.

4)RT-PCR-Einrichtung

Das Reaktionsvolumen auf 25μl und das PCR-Verstärkungsverfahren wie unten festgelegt. Fluoreszenz bei 60°C und wählen Sie NONE als passive Referenz.

5)ErgebnisEineAnalyseundIch...Auslegung